荧光分光光度计的原理和使用的注意事项

荧光分光光度计的原理和使用的注意事项

        荧光分光光度计是一种用于扫描液相荧光标记发出的荧光光谱的仪器。它可以提供包括激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等多种物理参数，从各个角度反映分子的键合和结构。荧光分光光度计具有灵敏度高、选择性强、样品量小、方法简单、工作曲线范围宽等优点，可广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机无机化学等领域。
        荧光分光光度计的工作原理：
        光源的氙弧灯发出的光通过光切割器使其成为断续光，激发光单色器变成单色光，该光为荧光物质 被测荧光物质在激发光下的激发光辐照通过单色器变成单色荧光，然后照射到供试品使用的光电倍增管上，其产生的光电流被放大器放大。输入到记录仪，激发光单色仪和荧光单色仪的光栅由电机驱动的凸轮控制。在绘制荧光发射光谱时，将激发光单色仪的光栅固定在最合适的激发光波长上。 转动荧光单色仪的凸轮，将各波长的荧光强度信号输出到记录仪，记录的光谱即为发射光谱，简称荧光光谱。
        荧光分光光度计测试注意事项：
         ①样品应置于四面透光的石英比色皿（荧光池）中。如果是挥发性样品，则应使用堵塞的荧光池。
         ②在荧光分析中，为了获得稳定可靠的数据，一般需要预热氙灯30分钟左右。如果仪器的光源是闪烁的氙灯，预热时间可以缩短到10分钟左右。对于一些易对光敏感、易分解的荧光物质，尽量使用波长长、光强低、短时照明。
         ③温度变化会引起荧光强度的变化。一般来说，降低温度有利于提高荧光量子产率，增加荧光强度。温度影响荧光强度的显着程度因样品而异。大多数荧光物质的荧光强度受温度影响不大，测试温度变化不超过±3℃，对测试结果几乎没有影响。
         ④当荧光物质为弱酸或弱碱时，溶液的pH值对荧光强度的影响很大。由于弱酸或弱碱处于不同的酸度，分子和离子的电离平衡会发生变化，荧光物质的荧光强度会因其解离状态而发生变化。
         ⑤荧光物质分子与溶液中其他物质分子的相互作用导致荧光强度下降。常见的荧光猝灭剂，如卤离子、重金属离子、O2、硝化物质、重氮化合物等。溶液中溶解的氧也可使几乎所有荧光物质产生不同程度的荧光消光。因此，在更严格的荧光实验中必须去除 02。